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細(xì)胞培養(yǎng)/細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟

更新時(shí)間:2024-02-25      點(diǎn)擊次數(shù):574

細(xì)胞培養(yǎng)/細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟

一、細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的注意事項(xiàng):


       1、確定所有的細(xì)胞操作用的溶液和耗材都已經(jīng)消毒并檢測(cè)沒(méi)有問(wèn)題,不確定的溶液和耗材請(qǐng)勿使用,除非特殊情況,不要借

用別人的溶液。


       2、確定衣服的袖口已經(jīng)卷起或者白大褂的袖口已經(jīng)扎緊。


       3、確定酒精燈內(nèi)的酒精量,需要的話及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)充。


       4、確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開(kāi)啟瓶蓋,實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前可以把所有瓶蓋旋松。


       5、盡量不要直接傾倒溶液,除非瓶口沒(méi)有被燒壞。如果傾倒失敗,溶液粘在瓶口,請(qǐng)用噴過(guò)75%酒精的紙巾仔細(xì)清潔瓶口

周?chē)ú灰佑|到瓶口)后在火焰上簡(jiǎn)單燒灼。


       6、操作時(shí)如果不能肯定所用的耗材是潔凈的,必須及時(shí)更換。


       7、實(shí)驗(yàn)完畢及時(shí)收拾,保持工作區(qū)域清潔整齊,最后用75%酒精清潔臺(tái)面。

二、細(xì)胞污染的預(yù)防


       1、實(shí)驗(yàn)用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒。各種溶液滅菌要仔細(xì),并在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陰性后才能

使用。操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。


       2、操作過(guò)程防止污染。


       3、穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進(jìn)入細(xì)胞間。


       4、實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前需要確定戴的手套沒(méi)有問(wèn)題,只要接觸過(guò)生物安全柜之外的物品,必須及時(shí)對(duì)手套進(jìn)行消毒。


       5、進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間后關(guān)好門(mén),坐下來(lái)盡量少走動(dòng)以免影響生物安全柜的風(fēng)簾。工作開(kāi)始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。

事先要嚴(yán)格檢查所用的器材、溶液和細(xì)胞,不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無(wú)菌室內(nèi),更不能隨便使用,以免造成大規(guī)模污染。


       6、細(xì)胞操作時(shí)動(dòng)作要輕,必須在火焰周?chē)鸁o(wú)菌區(qū)內(nèi)打開(kāi)瓶口,并將瓶口放在火焰周?chē)?jiǎn)單轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼,注意不要讓火焰把塑料

瓶口燒化。


       7、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)生物安全柜的隔板要盡可能放低,盡量減少談話,打噴嚏或咳嗽時(shí)絕對(duì)不能對(duì)著工作區(qū),以免造成不必要的

污染。


       8、瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h(yuǎn)離自己的地方,以避免瓶蓋被誤操作所污染。


       9、不要從敞開(kāi)的容器口上方經(jīng)過(guò),以避免衣服上掉落不明物體對(duì)細(xì)胞的污染。


       10、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)要注意及時(shí)更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管,切勿一根管子做到底。一旦發(fā)現(xiàn)接觸了非潔凈或者無(wú)法

確定潔凈的物品必須直接丟棄。實(shí)驗(yàn)完畢應(yīng)及時(shí)收拾,保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊,最后用75%酒精清潔臺(tái)面。


三、防止細(xì)胞交叉污染


       1、在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí),所用器具要嚴(yán)格區(qū)分,最好作上標(biāo)記便于辨別。按順序進(jìn)行操作,一次只處理一種細(xì)胞,

多種細(xì)胞多種操作一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生混亂。


       2、在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí),粘有細(xì)胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口,以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)基中污染其他細(xì)胞。


       3、所有細(xì)胞一旦購(gòu)置,或從別處引入,或自己建立,必須及時(shí)保種凍存,一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)。



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