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胚胎干細胞法的方法過程

更新時間:2024-04-16      點擊次數(shù):368

胚胎干細胞法的方法過程

分離囊胚的內細胞群(ICM)細胞,再進行體外培養(yǎng)即可取得胚胎干細胞。目前,取得胚胎干細胞的方法已有一定改進,但仍無可避免地會殺

死胚胎。


囊胚由兩大部分構成:處于外圍的滋養(yǎng)層以及處于內部的內細胞群。滋養(yǎng)層細胞會分化為胚胎外的組織(胎盤等),而內細胞群則會分化為

胚胎的各種結構。


最早期分離胚胎干細胞的方法是先用蛋白酶分解透明帶的蛋白質(囊胚外圍的一層細胞外基質),再利用免疫手術(immunosurgery)

專一地使滋養(yǎng)層細胞裂解,從而取得內部的內細胞群細胞,之后體外培養(yǎng)和繁殖取得的內細胞群細胞,即可建立胚胎干細胞系。

目前胚胎干細胞的分離方法已有了一定的改進,比如現(xiàn)在已有使用激光去除透明帶的技術。


獲取胚胎干細胞的成功率相當?shù)?,即使成功取得胚胎干細胞,維持其不分化的狀態(tài)也十分困難。為了阻止胚胎干細胞在培養(yǎng)過程中分化,

培養(yǎng)基需加入如白血病抑制因子(LIF)等因子。最初,胚胎干細胞需要在含有喂養(yǎng)層細胞的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。喂養(yǎng)層細胞能為胚胎干細胞提供

特定的微環(huán)境,以抑制胚胎干細胞的分化。喂養(yǎng)層細胞常常使用經過有絲分裂阻斷劑處理過的胚胎成纖維細胞。

目前已能在成分清楚、無異物、不含有血清以及喂養(yǎng)層細胞的培養(yǎng)基上培養(yǎng)胚胎干細胞。

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