心臟病是引起人類死因的一種代表性疾病,如果失去了心肌細(xì)胞,就會引起心力衰竭等心臟疾病。心肌細(xì)胞幾乎沒有再生能力,一旦失去就不能再生。從前認(rèn)為心臟當(dāng)中沒有干細(xì)胞,所以心肌沒有再生能力,但是近年的研究表明,成體心臟內(nèi)部也會存在一些心肌干細(xì)胞。公司開發(fā)出一種新型心肌干細(xì)胞培養(yǎng)方法,希望能為這項(xiàng)研究的科學(xué)工作者提供幫助。
細(xì)胞培養(yǎng)操作:
1.摘取出心臟,去掉心臟包膜,把心尖部分剪下來(心尖部分是心室部分,心肌細(xì)胞含量高)。
2.剪碎,移入15或50ml離心管中,用PBS多洗幾遍,盡量把血細(xì)胞洗掉。
3.加入2-3ml的50%血清+50%IMDM培養(yǎng)基,37℃、一小時(shí)浸泡。
4.采用貼塊法:用槍把組織塊連同培養(yǎng)基一同移入T25瓶中,然后用槍吸出培養(yǎng)基。在培養(yǎng)箱中放置1-2小時(shí),待組織粘貼在瓶底后,加入3ml含20%血清的IMDM培養(yǎng)基。
5.在貼塊培養(yǎng)到第三、四天時(shí),從組織塊上會脫落一些細(xì)胞團(tuán)和單個細(xì)胞,收集到15ml離心管中。
6.采用300rpm離心(或自然沉淀),去上清,取沉淀部分的細(xì)胞培養(yǎng)(多為細(xì)胞團(tuán))。
7.用IMDM/DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng):10%血清、30%IMDM、60%DMEM/F12、0.1mM β-ME、50xB27、20ng/ml bFGF、10ng/ml EGF。
8.細(xì)胞團(tuán)中的細(xì)胞在第二天就會出現(xiàn)圓形擴(kuò)散生長(呈集落生長,像太陽發(fā)光的模樣),細(xì)胞形態(tài)不像成纖維細(xì)胞那樣呈梭形狀,而是有些偏圓。
9.心臟干細(xì)胞生長速度很快,兩三天就能長滿。
一站式細(xì)胞解決方案
針對基礎(chǔ)及臨床研發(fā)中的原代細(xì)胞和iPS細(xì)胞的實(shí)驗(yàn),由于原代細(xì)胞的分離和培養(yǎng)難度大,iPS細(xì)胞制作和分化的實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜,除長期進(jìn)行原代和iPS培養(yǎng)工作的實(shí)驗(yàn)室,想要獲得足夠量的狀態(tài)好的細(xì)胞比較困難。
依靠多年在細(xì)胞培養(yǎng)方面的積累,為客戶提供完整的細(xì)胞CRO解決方案。根據(jù)客戶需求,直接在細(xì)胞水平進(jìn)行藥物或者試劑的刺激,觀察細(xì)胞狀態(tài)的變化或者特定通路上mRNA或蛋白的變化,也可以先制作動物模型,對動物進(jìn)行處理后,分離特定的原代細(xì)胞進(jìn)行需要的檢測。
同時(shí),我們可以依照客戶提供的具體實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行操作,也可以根據(jù)客戶要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),并根據(jù)客戶實(shí)驗(yàn)的規(guī)模和難度提供詳細(xì)的報(bào)價(jià)和實(shí)驗(yàn)周期規(guī)劃。
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